Kas ir RNS pastiprināšana?

RNS amplifikācija ir process, kas aizņem dažas ribonukleīnskābes (RNS) sadaļas kopijas un rada tūkstošiem kopiju, kas pēc sastāva ir identiskas. RNS gabali ir makromolekulas, kas sastāv no nukleotīdu virknēm, tāpēc amplifikācija ir vairāku posmu process, kas ietver precīzas nukleotīdu secības reproducēšanu no RNS gabala. RNS amplifikācija ir noderīga pētniecībā, kurā iesaistīti vīrusi, kuru ģenētisko materiālu var uzglabāt kā atmiņas RNS (mRNS), nevis DNS; gēnu ekspresijas pētīšana organismos; un proteīnu radīšana no transkripcijas RNS (tRNS). Lai pastiprinātu RNS, tiek izveidota un pastiprināta papildu secība, pēc tam tiek izmantota kā veidne RNS kopiju izveidei. DNS starpnieks ir nepieciešams RNS amplifikācijai, jo RNS parasti notiek tikai vienas virknes, nesapārotā formā, tāpēc ir jāizveido DNS veidne, lai RNS transkriptāzes enzīms darbotos; RNS nevar pārrakstīt no sevis.

Pirms RNS amplifikācijas sākšanas interesējošā RNS secība vispirms ir jāizolē no piesārņojošā materiāla. Pēc tam RNS veidnei pievieno enzīmu reverso transkriptāzi. Reverso transkriptāzi izmanto, lai izveidotu šūnu DNS (cDNS) bāzu pāru secību, kas ir komplementāra oriģinālajai mRNS. Šo pirmo cDNS virkni pēc tam var izmantot, lai izveidotu otro cDNS virkni, ko var izmantot polimerāzes ķēdes reakcijā, procesā, kas pastiprina DNS virknes, izmantojot atkārtotus DNS replikācijas ciklus un pēc tam atdalot abus pavedienus. cDNS parasti satur praimerus vai fermentus vienā DNS sekvences galā, kas kalpo kā signāli nukleotīdu saistīšanai un tādējādi mRNS virkņu ražošanai, kas ir identiskas sākotnējai secībai.

Pastāv vairākas RNS amplifikācijas metodes, bet metodi, kas dod lielāko mRNS daudzumu, kas ir uzticama oriģinālajai kopijai, sauc par veidņu maiņas metodi. Šajā metodē tiek izmantots Moloney peles leikēmijas vīrusa reversās transkriptāzes enzīms, kas pirmās virknes cDNS galam pievieno primer reģionu pēc šīs virknes izveidošanas no RNS veidnes. Šis praimera reģions tiek pievienots arī otrajai cDNS virknei, no kuras tiek izgatavotas pastiprinātas RNS kopijas. Cits enzīms, ko sauc par promotoru, var tikt saistīts ar primer reģionu otrajā cDNS virknē, kas krasi palielina RNS kopiju daudzumu, kas tiek ražots no šīs cDNS virknes, izmantojot transkripciju.