Nikotīnu var noteikt, izmantojot dažādus testus, kas mēra ķīmiskās vielas, ko sauc par kotinīnu, līmeni. Ķermenis ražo kotinīnu tikai tad, kad nikotīns nonāk organismā, piemēram, lietojot cigaretes, pīpju tabaku, šņaucamo tabaku, cigārus vai košļājamo tabaku. Kotinīnu var noteikt, pārbaudot cilvēka asinis, matus, siekalas vai urīnu. Pārbaužu rezultāti var parādīt, vai persona ir pašreizējais vai bijušais tabakas lietotājs.
Ir dažādi iemesli, kāpēc var veikt nikotīna testu. Vecāki dažreiz izmanto testus, lai noteiktu, vai viņu bērni ir smēķējuši. Dažu uzņēmumu veselības apdrošināšanas pakalpojumu sniedzēji pieprasa nikotīna pārbaudi, lai novērtētu potenciālā darbinieka veselības riskus. Testēšanu var izmantot arī smēķēšanas atmešanas programmās, bērnu aizbildnības gadījumos, kad persona piesakās dzīvības apdrošināšanai vai pētniecības nolūkos.
Urīna tests ir plaši izmantota nikotīna noteikšanas metode. Kotinīna līmeni urīnā mēra, izmantojot testa strēmeli vai uz testa diska uzliekot dažus pilienus urīna. Urīns, kas satur kotinīnu, reaģē ar testa materiāliem, uzrādot pozitīvu vai negatīvu rezultātu. Mājas narkotiku testu komplekti ir viegli pieejami aptiekās vai internetā tiem, kas vēlas veikt nikotīna pārbaudi privāti. Nikotīna urīna tests ir derīgs apmēram četras dienas pēc tam, kad cilvēks pēdējo reizi lietojis tabaku.
Siekalu novērtēšana nikotīna testēšanai ir process, kas līdzīgs urīna testam. Šim novērtējumam siekalu paraugs tiek novietots uz testa strēmeles, un rezultāts tiek iegūts aptuveni pusstundas laikā. Lai gan nikotīna siekalu tests sniedz konsekventus un precīzus rezultātus, tas var uzrādīt pozitīvu nolasījumu pēc sekundāro dūmu iedarbības. Vecāki dažreiz izmanto siekalu mājas testa komplektus, lai noteiktu, vai viņu bērni ir smēķējuši.
Asins analīze nikotīna testēšanai nav tik uzticama kā urīna vai siekalu testi. Kad cilvēks lieto tabaku, nikotīna līmenis asinīs paaugstinās gandrīz uzreiz un paliek klāt vairāk nekā divas nedēļas. Nikotīna līmenis asinīs var atšķirties atkarībā no cilvēka vielmaiņas, lietotās tabakas veida un dūmu ieelpošanas dziļuma. Daži darba devēji dod priekšroku asins analīzei, jo viņi var vienlaikus pārbaudīt nikotīnu un nelegālās narkotikas.
Kotinīns var palikt matu folikulās līdz pat gadam pēc tam, kad cilvēks ir pārtraucis tabakas lietošanu. Nikotīna testēšana ar matu paraugiem ir dārga, un to reti izmanto apdrošināšanas kompānijas vai darba devēji. Parasti tas attiecas tikai uz pētījumiem, kas mēra pasīvās smēķēšanas ietekmi uz nesmēķētājiem. Šāda veida pārbaudei ir piemēroti mati no jebkuras ķermeņa daļas.