Kas ir biotīna antiviela?

Biotīns ir B kompleksa vitamīns — B7 vitamīns. Tā ir tik maza molekula, ka vairākas biotīna molekulas var konjugēt ar vienu monoklonālu vai poliklonālu antivielu. Fakts, ka biotīns ir arī ūdenī šķīstošs, nodrošina lielāku bufersistēmu daudzpusību nekā tad, ja tas būtu nešķīstošs. Lai iegūtu lielāku specifiskumu, bieži vien ieteicama monoklonālo antivielu konjugācija ar biotīnu, nevis poliklonālo antivielu konjugācija. Biotīna molekulu var tieši saistīt ar interesējošo antivielu, vai arī to var saistīt ar molekulāro asti, lai nodrošinātu lielāku pārvietošanās brīvību.

Biotīna ligands avidīns ir atrodams olu albumīnā. To var lēti izgatavot un viegli izolēt. Vairākas avidīna molekulas saistās ar katru biotīna receptoru, pastiprinot vienu antivielu noteikšanas signālu. Kad biotīna antiviela pielīp interesējošam antigēnam, eksperimentētājs pēc tam var pakļaut kompleksu avidīnam, kas konjugēts ar fluoroforiem, padarot kompleksu nosakāmu. Izmantojot fluorescējošu attēlveidošanu, biotīna antivielu un avidīna konjugēto ligandu var noteikt ar gaismas mikroskopiju, un interesējošos antigēnus var pētīt in situ.

Lai gan biotīna antivielas un fluorescējoši marķētas avidīna molekulas izveide un izmantošana ir izplatīts risinājums antigēnu noteikšanai, pastāv alternatīvas, kurās joprojām tiek izmantots biotīna/avidīna komplekss. Biotīna saistīšana ar ligandu, piemēram, neirotoksīnu, var būt izdevīga, lai noteiktu attiecīgā neirotoksīna ietekmēto neironu receptoru izvietojumu. Ir arī iespējams konjugēt biotīnu ar nukleotīdu secību, piemēram, ribonukleīnskābi (mRNS), lai noskaidrotu, kur šīs nukleotīdu sekvences tiek pārvērstas olbaltumvielās vai noteikt šūnu mRNS regulējumu.

Ir iespējams iegādāties biotinilētas poliklonālās vai monoklonālās antivielas, lai gan biotinilētu antivielu ražošana ir daudzu eksperimentētāju spēju robežās. Tiešsaistē var atrast protokolus, kuros ir ieteiktas antivielu biotinilēšanas metodes, lai gan visvieglāk izpildāmie protokoli tieši saista biotīnu ar antivielu, nevis iesaka molekulāro starplikas interkalāciju. Molekulārie starplikas starp biotīnu un ar to saistīto antivielu nodrošina lielāku atstarpi, lai vairāk molekulu pakļautu saistīšanās vietām, un šīs biotīna antivielas parasti tiek iegādātas, nevis izgatavotas.