Kas ir elektroforētiskās mobilitātes maiņas tests?

Pārbaude ir tests, kas paredzēts, lai atdalītu šūnas oriģinālos gabalus daļās, kuras ir viegli identificēt. Elektroforētiskās mobilitātes maiņas tests ir eksperiments, kurā izmanto elektrību, lai pārvietotu makromolekulas, piemēram, olbaltumvielas, caur gēla matricu, lai izraisītu atdalīšanu starp dažādām makromolekulām, pamatojoties uz izmēru. Tāpat kā automašīnas akumulatoram, negatīvie un pozitīvie gali atrodas elektroforētiskās mobilitātes maiņas testa vai gēla nobīdes testa pretējās pusēs. Tas liek elektrībai piesaistīt makromolekulas, pamatojoties uz lādiņu. Katra makromolekula pārvietojas ar atšķirīgu ātrumu, jo mazākās gēls traucē mazāk.

Lai iestatītu elektroforētiskās mobilitātes maiņas testu, ir jāveic vairākas darbības. Vispirms jāsagatavo makromolekulas, kuras nepieciešams atdalīt. Lielākā daļa makromolekulu tiek iegūtas no dzīvām šūnām, un tām ir nepieciešamas īpašas procedūras. Lai iegūtu atdalāmās daļas, bieži vien ir nepieciešama centrifūga un ķīmiska reakcija, kas sadala šūnas. Centrifūga griezīs flakonu lielā ātrumā un veidos nepieciešamo makromolekulu granulu. Tas tiek izšķīdināts, un bieži vien tiek pievienota krāsa vai cita etiķete, lai palīdzētu izsekot gēla maiņas testam.

Gēlam, ko dažreiz sauc par gultni, ir jābūt arī svaigi izgatavotam no precīza pulverveida agarozes un ūdens maisījuma, kas ātri pārvēršas no šķidruma par želeju. Parasti elektroforētiskās mobilitātes maiņas testā ir vairākas joslas atsevišķiem testiem, ko izmanto dažādu makromolekulu maisījumu salīdzināšanai. Viena josla vienmēr ir iestatīta kā kontrole, un tajā parasti ir tikai viena veida makromolekula.

Strāvas avots ir rūpīgi jāizvēlas un nav pievienots, kamēr viss nav gatavs. Laiks, kurā jauda ir ieslēgta, nosaka makromolekulu mobilitātes nobīdi. Lai veiktu pareizu analīzi, ir svarīgi pietiekami atdalīt gabalus. Ja jauda nav pareizi iestatīta, arī turpmākie salīdzinājumi būs neprecīzi. Makromolekulu virzienu noteiks tas, kāds lādiņš tām piemīt dabiski — lielākā daļa virzās uz negatīvo galu.

Vienkāršus ģenētiskos testus un olbaltumvielu analīzes parasti veic ar elektroforētiskās mobilitātes maiņas testu. To parāda dažādas maiņas dažādās joslās. Ja notiek mijiedarbība, makromolekulas apvienojas un iet cauri matricai lēnāk, salīdzinot ar kontroles joslu, kurā ir tikai viena makromolekula. Gēla maiņas testi tiek izmantoti, lai ātri likvidētu vai apstiprinātu ģenētiskos rezultātus, kuru pabeigšana sarežģītas metodes var aizņemt ilgāku laiku. Viņi var arī noteikt, vai antivielas, imūnsistēmas makromolekula, pielīp pie olbaltumvielām, kuras var izmantot cīņā pret baktērijām un vīrusiem.