Kas ir Western Blot?

Western blotā paraugam, kas var būt no asinīm vai audiem, vispirms tiek veikta elektroforēze, lai olbaltumvielas atdalītos pēc garuma. Elektroforēzes gēla sloksni ar izolētiem mērķa garuma proteīniem var izmantot, lai pārnestu proteīnus uz nitrocelulozes substrātu nākamajam testa posmam. Šajā posmā paraugā tiek ievadīta antiviela, kuras mērķis ir marķēt olbaltumvielas ar antigēniem, pie kuriem šī antiviela bloķējas.

Kad proteīni ir marķēti, tos var viegli identificēt. Slimību pārbaudes gadījumā reaktīvā proteīna klātbūtne norāda, ka paraugs ir bijis pozitīvs. Western blots reti atgriež viltus pozitīvus rezultātus, lai gan tas var notikt reizēm, un tie var arī atgriezt viltus negatīvus rezultātus, kuros personai patiešām ir slimība, bet tā netiek parādīta Western blot testā. Īpaši bieži tas var notikt gadījumos, kad slimības izraisītājs vēl nav sācis vairoties.

Pētnieki var izmantot rezultātus, lai identificētu konkrētus proteīnus, kurus viņi izseko, un dažādiem citiem mērķiem. Izpratne par to, kā darbojas Western blot protokols, dažiem pētniekiem un laboratorijas tehniķiem ir svarīga prasme, jo viņiem ir jāspēj atgriezt uzticamus un uzticamus rezultātus, izmantojot šo metodi. Laboratorijas prasmes, tostarp mācīšanās, kā rīkoties ar sarežģītiem vai sliktiem paraugiem un kā procesa laikā izvairīties no piesārņojuma, lai būtu zināms, ka testa rezultāti ir patiesi.

Šo paņēmienu dažreiz sauc par imūnblotu, jo būtībā vēlamās olbaltumvielas tiek “izsūknētas” ar antivielām, lai tās tiktu parādītas. Šo testu var izmantot, lai meklētu proteīnus visos dzīvniekos, ne tikai cilvēkiem, un veterinārārsti bieži izmanto Western blot testu, lai noteiktu, vai govju ganāmpulks ir inficēts vai pakļauts GSE.