Kas ir Western Blot antivielas?

Gandrīz jebkuru vielu var izmantot, lai ražotu monoklonālu antivielu, kas saistās ar tai radniecīgo proteīnu Western blot kultūrā. Poliklonālās antivielas tiek ražotas gandrīz tādā pašā veidā, taču process ir sarežģītāks, jo antivielas ir jāievāc no imūno B šūnu resursiem, nevis vienkārši jāklonē no mātes šūnas. Pieaugošā imūnglobulīna ražošanas tehnoloģija no dažādām vielām tiek uzskatīta par nenovērtējamu līdzekli bioķīmijā, molekulārajā bioloģijā un medicīnā. Western blot analīze var noteikt proteīnus, kas saistīti ar HIV, Laima slimību un Kreicfelda-Jakoba slimību — govju trakuma slimību, kā rezultātā ārsti var noteikt galīgo diagnozi agrāk slimības progresēšanas gaitā. Papildus šiem lietojumiem kriminālistikas zinātnē var izmantot arī Western blot antivielu tehnoloģiju, lai identificētu asins vai citu vielu paraugus nozieguma vietā.

Neatkarīgi no tā pielietojuma mērķa proteīna noteikšanas process audu paraugā sākas ar antivielas daudzuma reproducēšanu no zināma avota. Monoklonālās antivielas var ražot no esošās kultūras, bet poliklonālo antivielu ražošanas process ir ievērojami laikietilpīgāks. Process parasti ietver neaktīvu vai dzīvu daļiņu injicēšanu saimniekdzīvniekam, piemēram, pelei vai kazai, un šajā brīdī dzīvnieka B-limfocīti ražo imūnglobulīnus, kas ir specifiski antigēnam. Pēc tam paraugam pievieno mazgāšanas līdzekļus un buferšķīdumus, kas novērsīs imūnglobulīnu sagremošanu ar jebkuriem dabīgiem enzīmiem, un gēla elektroforēzi izmanto, lai atdalītu olbaltumvielas pēc molekulmasas vai izoelektriskā lādiņa. Western blot antivielas tagad ir gatavas “blotēšanas” procesam, kas ir antivielu pārnešana uz membrānu, vienlaikus ņemot vērā specifiskos blot modeļus, kas rodas pārvietošanas laikā un kas ir unikāli identificējamajam proteīnam.