Kas ir ELISA protokols?

Lai gan ELISA protokols nedaudz atšķiras atkarībā no veiktā ELISA veida, pamatkoncepcija visiem tiem ir vienāda. ELISA ir atkarīga no ar enzīmu saistītām antivielām, ko sauc arī par antiglobulīniem. Signāla molekula, kas pievienota šiem antiglobulīniem, izraisa testa laikā pievienotā substrāta krāsas maiņu, ja ir vēlamais antigēns vai antiviela. Esošā antigēna vai antivielu daudzums ir proporcionāls krāsas maiņas apjomam, ko var izmērīt ar elektronisko plākšņu lasītāju.

Ir trīs galvenie ELISA veidi. Tiešo ELISA parasti izmanto, lai noteiktu antigēnus, nevis antivielas. Šis ir vienkāršākais ELISA protokols, jo ar enzīmu saistītā antiviela tieši saistās ar vēlamo antigēnu. Pēc tam pievieno substrātu, lai noteiktu esošā antigēna daudzumu.

Antivielu noteikšanai izmanto netiešo ELISA, savukārt antigēnu noteikšanai var izmantot cita veida netiešo ELISA, ko sauc par sviestmaižu ELISA. Sviestmaižu ELISA protokolam ir nepieciešamas divas antivielas, ko sauc par uztveršanas un noteikšanas antivielām, lai saistīties ar vēlamo antigēnu. Pievieno antiglobulīnu, kas saistās ar noteikšanas antivielu, un pievieno substrātu. Netiešajā ELISA testā tiek izmantots līdzīgs protokols, taču, lai noteiktu vēlamo antivielu, izmanto uztveršanas antigēnu, nevis uztveršanas antivielu.

Konkurētspējīgu ELISA bieži izmanto, lai noteiktu antigēnus, kas atrodas zemā koncentrācijā, jo tas ir ļoti jutīgs tests. Atšķirībā no citiem ELISA protokoliem konkurētspējīgā ELISA izmanto ar enzīmu saistītu antigēnu, nevis antivielu, un nedaudz atšķirīgu kvantitatīvās noteikšanas metodi. Tajā paraugs, kas satur nosakāmo antigēnu un ar enzīmu saistīto antigēnu, tiek pievienots antivielai, un abi antigēni sacenšas par antivielu saistīšanas vietām. Kad substrāts tiek pievienots, krāsas izmaiņas ir lielākas, ar lielāku saistīto enzīmu antigēnu attiecību pret saistītajiem parauga antigēniem. Tas nozīmē, ka lielākas krāsas izmaiņas tiek noteiktas pie zemākām parauga antigēna koncentrācijām, kas padara šo metodi tik jutīgu.