Kas ir ELISA metode?

ELISA tests tika izstrādāts 1960. un 1970. gados, lai aizstātu imunoloģiskos testus, kas ietvēra radioaktīvo antivielu un antigēnu izmantošanu. Radioaktīvo materiālu izmantošanas riski padarīja testēšanas procesu apgrūtinošu un nedrošu, un ELISA metodes ieviešana atrisināja abas šīs problēmas. Tā vietā, lai testa rezultātu noteikšanai izmantotu radioaktīvos materiālus, ELISA izmanto fermentus, kas reaģē ar antivielām, veidojot krāsainus produktus. Krāsas attīstība ELISA testā norāda uz pozitīvu rezultātu.

Ir vairāki dažādi ELISA testu veidi. Visbiežāk izmantotā ELISA metode tiek saukta par netiešo ELISA metodi; tas ir antivielu tests, ko izmanto, lai noteiktu, vai paraugā ir noteikta veida antivielas un kādā koncentrācijā. Diagnostikas medicīnā šo testu izmanto, lai noteiktu antivielu klātbūtni pret infekcijas slimībām, piemēram, HIV, hepatītu un citām. Antivielu klātbūtne pret šīm slimībām norāda, ka pārbaudāmā persona ir bijusi pakļauta infekcijas izraisītājiem. Parasti izmantotais paraugs ir pacienta asinis.

Šajā testā mikrotitrēšanas plāksnes pārklājumam izmanto specifisku antigēna proteīnu. Šajā mazajā plastmasas plāksnē ir 96 mazas iedobes, un katrā iedobē var veikt vienu ELISA testu. Konkrētajā testā izmantotais antigēns ir atkarīgs no antivielas veida, ko tests mēģina noteikt. Piemēram, ja ELISA testu izmanto HIV testam, izmantotais antigēns būtu specifisks šim vīrusam.

Testam turpinoties, katrā mikrotitrēšanas plates iedobē pievieno nelielu daudzumu nezināmā parauga un plati inkubē, lai paraugā būtu laiks, lai antivielas saistās ar antigēnu. Pēc tam katrai plāksnes iedobei pievieno sekundāro noteikšanas antivielu. Ja paraugs satur kādu no testējamo antivielu tipiem, tas saistīsies ar sekundāro noteikšanas antivielu nākamajā inkubācijas periodā.

ELISA metodes atslēga ir tāda, ka sekundārā antiviela tiek marķēta ar noteikta veida fermentu. Izmantotais ferments spēj mainīt testa parauga krāsu, kad tas reaģē ar tā substrātu. Tāpēc, ja paraugā ir kāda no testējamajām antivielām, substrāta pievienošana iedobei izraisīs tā krāsas maiņu sekundārās antivielas un ar to saistītā enzīma klātbūtnes dēļ.

Ir arī citas ELISA metodes variācijas, tostarp tests, ko sauc par sviestmaižu ELISA. To izmanto, lai paraugā noteiktu antigēnus, nevis antivielas. Šajā testā mikrotitrēšanas plāksne ir pārklāta ar standartizētu antivielu paraugu. Pēc tam pievieno antigēna testa paraugu, kam seko sekundārās noteikšanas antivielas un ar to saistīto enzīmu pievienošana. Tāpat kā ar netiešo ELISA testu, krāsaina produkta veidošanās norāda uz pozitīvu rezultātu.