Kas ir SYBR Green®?

Īsā atbilde

SYBR Green® ir fluorescējoša krāsviela, kas ar lielu specifiskumu saistās ar divpavedienu DNS. To plaši izmanto molekulārās bioloģijas pētījumos, lai kvantitatīvi noteiktu un vizualizētu divpavedienu DNS. SYBR Green® ir sintētiska krāsviela, ko deviņdesmito gadu sākumā ieviesa Molecular Probes®, Inc., Invitrogen&trade Corporation meitasuzņēmums. Tā ir asimetriska cianīna krāsviela, un cianīni ir sintētisko organisko krāsvielu saime, ko izmanto fotogrāfijās, CD-R un DVD-R datu nesējos, kā arī dažādos molekulārās bioloģijas pētniecības lietojumos.

Vairākas funkcijas padara SYBR Green® īpaši noderīgu kā nukleīnskābju traipu. Tas ir stabils dažādos temperatūru diapazonos, kas nozīmē, ka to var izmantot, lai uzraudzītu bioķīmiskās reakcijas, kas notiek augstā un zemā temperatūrā. Tas nekovalenti saistās ar DNS virsmu, kas nozīmē, ka tas netraucēs vairumam nukleāžu un DNS polimerāzes. Tas arī saistās ar nukleīnskābēm dinamiskā lineārā diapazonā līdz četrām lieluma kārtām, tāpēc tas var sniegt precīzu DNS kvantitatīvu noteikšanu plašā koncentrāciju diapazonā.

Visizplatītākais SYBR Green® lietojums laboratorijā ir divpavedienu DNS noteikšana reālā laika polimerāzes ķēdes reakcijā (PCR) un akrilamīda gēlos. PCR ir paņēmiens dažu DNS kopiju pastiprināšanai, izmantojot atkārtotus DNS replikācijas ciklus. Reāllaika PCR mēra amplifikāciju, kad tā notiek, un, tā kā SYBR Green® saistās ar divpavedienu DNS, DNS-krāsu kompleksa fluorescences emisijas mērīšana ļauj pētniekam noteikt saražotās DNS daudzumu. PCR cikliem progresējot, fluorescence palielinās proporcionāli saražotā PCR produkta daudzumam.

Akrilamīda gēli ir visuresoši molekulārās bioloģijas laboratorijās, jo tie kalpo parasti nepieciešamajam mērķim DNS fragmentu atdalīšanai pēc izmēra. SYBR Green® ļauj pētniekam vizualizēt DNS akrilamīda gēlā, spīdot uz to atbilstoša viļņa garuma gaismu. Citi SYBR Green® lietojumi ietver nukleīnskābju noteikšanu šķīdumā, biočipu lietojumos un plūsmas citometrijā. DNS-krāsu komplekss absorbē zilo gaismu pie 488 nm un izstaro zaļo gaismu pie 522 nm.

SYBR Green® ir ļoti jutīgs; tas ir 25 reizes jutīgāks par etīdija bromīdu, citu bieži lietotu krāsvielu DNS vizualizēšanai. SYBR Green® augstā afinitāte pret divpavedienu DNS padara to noderīgu, lai noteiktu DNS paraugus ar zemu kopiju skaitu. Tas galvenokārt saistās ar divpavedienu DNS, bet tas var saistīt arī vienpavedienu DNS ar samazinātu fluorescenci. Tāpat kā jebkura DNS saistoša molekula, SYBR Green® var izraisīt mutācijas un ir iespējams kancerogēns. Tomēr ar to ir drošāk strādāt un vieglāk atbrīvoties nekā ar etīdija bromīdu.

Īsā atbilde

Saistītie jautājumi